親和純化樹脂和方法

親和純化（也稱為親和色譜）被認為是強大的方法 純化色譜 或從復雜的混合物（如粗細胞裂解物、細胞培養上清液或其他樣品）中富集感興趣的蛋白質。 

雖然選擇性沉淀可能在某種程度上有助于分離不同類型的大分子，但大多數純化方法依賴于溶液中分子與固體、固定材料的物理或化學相互作用的差異來達到預期的結果。 

例如，在親和純化中，通過用與所需分子特異性結合的化學固定配體處理固體載體，將目標分子與溶液中的其他組分分離。因此，當復雜的混合物通過色譜柱時，目標分子與配體結合，而溶液中的非結合組分則簡單地用適當的緩沖液沖洗掉。 

最后，改變緩沖條件以破壞配體和目標分子之間的結合相互作用，并在此過程中洗脫高度純化的目標分子。

親和純化功能非常強大，因為通過親和柱一次，可以將樣品純化一千倍以上。

親和純化的堅實支撐

基本上，親和色譜中使用兩種類型的固體載體：多孔凝膠載體或樹脂和磁珠。但是，在本文中，我們將主要關注親和純化樹脂。

樹脂或凝膠載體通常是基于糖或丙烯酰胺的聚合物樹脂，在溶液中產生 直徑50-150μm的珠子。除了極其多孔之外，珠子還足夠大，允許生物分子在磁珠表面周圍以及通過和在珠子之間暢通無阻地移動。此外，串珠形式也使實驗室的工作更容易、更方便，因為它們可以很容易地分配以包裝任何尺寸的色譜柱。

此外，由于配體共價連接到珠狀聚合物的外表面和內表面，因此允許樣品分子自由流動通過固定配體的高表面積。

目前，大多數實驗室使用交聯珠狀瓊脂糖進行蛋白質親和純化，因為它是重力流、低壓程序和低速離心的理想選擇。珠狀瓊脂糖樹脂也可以進行額外的交聯和化學硬化，以提高其承受高壓的能力，但要預先警告，這會顯著降低結合能力。

該基質通常具有4%（CL-4B）和6%（CL-6B）密度，均具有培養基偶聯能力，適用于相同的應用（蛋白質印跡、高通量篩選、相互作用研究、突變分析、功能測定、結構分析）。磁珠的尺寸通常在 45 至 165 μm 之間，它們都具有 0.35 MPa 的壓力限制。它們僅在排除限制方面有所不同（CL-4B 為 20，000 kDa，CL-6B 為 4，000 kDa）。

除瓊脂糖凝膠外，聚丙烯酰胺基樹脂也可用于柱親和色譜。雖然這兩種介質都具有較低的非特異性結合特性，但聚丙烯酰胺基樹脂不易壓縮，可以承受中壓應用。

G-Biosciences 提供廣泛的親和純化試劑盒和樹脂，以適應各種應用。這里有一些 例子 這可以幫助您解決親和純化挑戰。  

• 用于親和素-鏈霉親和素和中性粒蛋白純化的固定化生物素和亞胺生物素樹脂

• 鈣調蛋白樹脂用于純化鈣調蛋白結合蛋白 （CBP）

• 固定化對氨基苯基磷酸膽堿和更具成本效益的固定化O-磷酸乙醇胺用于C反應蛋白純化

• GST 標記或 His 標記的蛋白質純化試劑盒或樹脂

• 固定化肝素和凝集素，用于分離脂蛋白、生長激素、止血蛋白和其他生理標志物

• 硫丙基樹脂 用于純化含蛋白質的硫醇基團。

G-Biosciences提供含大量用于純化蛋白質、核酸和其他生物分子的樹脂和磁珠。 幾種樹脂通常用于在純化過程中去除干擾劑。 該手冊首先介紹了預活化的樹脂，以便研究人員可以通過各種基團偶聯蛋白質和其他生物分子。接下來的部分是用于純化特定標簽和基序的樹脂，包括6X組氨酸、生物素等。 主要色譜樹脂包括用于離子交換色譜和體積排阻色譜的樹脂。 最后，大量樹脂旨在去除常見的有問題的化學物質和生物分子，包括洗滌劑、內毒素等。

《純化樹脂手冊》包括以下部分：

• 親和純化樹脂
  

• 用于偶聯巰基、胺、羧基、碳水化合物和活性氫的預活化樹脂

• 親和素和鏈霉親和素純化樹脂
  

• 固定化生物素和低親和力的伊尼博汀

• 用于純化生物素和生物素標記分子的樹脂

• 固定化親和素和單體親和素以及低親和力鏈霉親和素

• 用于CBP標簽的鈣調蛋白樹脂

• C-反應蛋白純化樹脂

• GST標記的蛋白質純化

• 用于酵母和細菌重組蛋白的谷胱甘肽樹脂和蛋白質純化試劑盒

• 組氨酸標記蛋白純化

• IDA 和 NTA 樹脂、色譜柱、板和磁珠

• 提供鎳、鈷、銅和鋅版本

• 固定化肝素

• 用于碳水化合物分離的固定化凝集素

• 凝集素純化樹脂

• 核酸純化樹脂

• 固定化硼酸和二氧化硅磁珠

• 蛋白酶純化樹脂

• 抗體純化樹脂

• 蛋白 A、蛋白 G 和蛋白 A/G 樹脂和色譜柱

• IgA純化樹脂

• 親硫吸附

• 凝膠過濾/體積排阻色譜

• 疏水作用色譜

• 離子交換色譜

• 陰陽離子交換器

• 除污樹脂

• 去污樹脂

• 內毒素去除樹脂

• 脫鹽和緩沖液交換離心柱

• 還原劑樹脂，包括TCEP

• 去除白蛋白

• 多種一次性色譜柱可供選擇