Duolink® PLA熒光實驗方案

Duolink® PLA試劑

有關具體的產品建議，請參閱Duolink® PLA產品選擇指南。簡單來說，要運行用于熒光檢測的Duolink® PLP實驗，需要以下Duolink® PLA產品：

一、Duolink® PLA探針（一種PLUS和一種來自不同物種的MINUS，與您的一抗宿主物種相匹配）。每個試劑盒包括：

1.PLA探針（5x）— PLUS和/或MINUS，取決于產品；

2.封閉溶液 — 用于在孵育抗體前封閉樣品；

3.抗體稀釋劑 — 用于稀釋PLA探針，而且如果需要，用于稀釋一抗。

注意：將試劑盒的所有組分存放在4°C溫度下。

注意：如果需要，可用Duolink® PLA試劑盒生成定制的PLA探針。

二、Duolink®熒光檢測試劑（可選擇綠色、橙色、紅色等）

每個試劑盒包括：

1.連接原液（5x） – 稀釋以制備1x連接緩沖液

2.連接酶 (1 U/μL) – 添加以制備連接溶液

3.擴增原液 (5x) – 稀釋以制備1x擴增緩沖液

4.聚合酶 (10 U/μL) - 添加以制備擴增溶液

注意：將所有組分存放在-20°C溫度下。

三、熒光用洗滌緩沖液。

四、含DAPI的Duolin封固劑用于載玻片，儲存在2-8°C）或者細胞核染色劑和抗淬滅劑（用于微孔板，儲存在-20°C）

其他材料!

1.檢測目標蛋白質的一抗。當與Duolink® PLA探針一起使用時，必須在小鼠、兔子或山羊中飼養。

2.高純度純水（無菌過濾，Milli-Q®或類似水質）

3.載玻片上的樣品（細胞或組織），已經過固定、恢復和透化方面的預處理。關于下列主題的相關建議和詳細信息，請參閱如何優化Duolink®鄰近連接測定：

1.實驗設計和對照

2.選擇一抗和優化

3.樣品處理

設備

1.熒光顯微鏡，帶有適當的濾光片、照相機和圖像采集軟件

2.37°C培養箱

3.水平搖床

4.加熱濕度箱或微孔板傳熱座

5.疏水筆，用于給反應區域劃界

6.冰塊（用于酶）

7.染色罐

8.鑷子

9.移液器和吸頭（1 μl至1000 μl）

10.與熒光顯微鏡兼容的蓋玻片