如何使用 OD600 測量和因素確定微生物培養物的細胞密度？

在 600 nm 處測量光密度 （OD） 是確定細菌或酵母培養物密度的常用分光光度法，通常在細菌或酵母生長階段。OD600 測量是一種快速便捷的測定細胞密度的方法，這些細胞通常是單細胞的、太小且運動的，無法使用典型的基于圖像的顯微方法進行計數。

可以建立與特定細胞類型的預期密度相匹配的目標 OD 600 值，以簡化相同樣品類型的未來測量。這是微生物實驗室在細胞生長的各個階段檢查和維護樣品的一種簡單方法，包括細胞周期的滯后期、對數期（也稱為指數期）和穩定期。

了解 OD 測量的當前限制

雖然分光光度計是進行這種測量的好工具，但 OD 實際上是光散射的量度，而不是真實吸光度的量度。因此，測得的 OD 受細胞類型的大小和形狀、樣品活力或生長期、分光光度計的光學配置以及光譜儀的線性范圍等因素的影響。

為了考慮影響測量 OD 的因素，建議根據生長曲線憑經驗確定目標 OD 600 值。通過將測得的 OD 600 值與每種細胞類型的集落形成單位 （CFU） 板計數相關聯來創建生長曲線。

一旦建立了生長曲線并確定了細胞類型的目標 OD，就可以使用測量模式或分光光度計之間的轉換因子來使用不同的光學配置。例如，DS-11 系列分光光度計超微量模式采用與 DS-11 系列比色皿模式不同的光學配置，因此在兩種模式下測量的樣品將檢測不同的光散射。

在這種情況下以及使用不同品牌或型號的分光光度計時，轉換因子很有用。該系數的計算方式如下所示：

在上述情況下，在 DS-11 系列微量和比色皿模式之間切換時，計算轉換因子特別有用。對于測量的光程，基于比色皿的儀器的線性范圍通常在上限限制為 1.5 吸光度單位 （AU） 左右。這可能不夠高，無法覆蓋給定樣品的生長周期，并且可能與生長不成線性關系。

微量模式使用較短的光程，因此可以更準確地測量密度較大的樣品，而無需稀釋。這樣可以更好地跟蹤指數生長、子細胞的產生和整體細胞分裂，尤其是在各種環境條件下生長的細菌種群和細菌菌落中。