海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測試盒

海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測試盒

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

海藻糖是由兩個葡萄糖分子以α ,  α- 1- 1  糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖， 廣泛存  在于細菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、 無脊椎動物和高等植物等多種有機體 中。海藻糖的非還原性決定了它對酸、堿、高溫等的穩定性。另外， 它本身具有很強的吸水 性，使它在生物體內具有抗脫水作用，在逆境條件下可通過識別外界刺激、產生和傳遞信號、 基因表達和代謝調節來保護植物免受不良環境的傷害。

植物體內主要以葡萄糖為底物合成海藻糖，該反應首先在海藻糖-6-磷酸合成酶

（trehalose-6-phosphate synthase ，TPS）的作用下，催化尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）和 6- 磷酸葡萄糖反應生成中間產物6-磷酸海藻糖， 再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 （trehalose

6-phosphate phosphatase ，TPP）的作用下去磷酸化，生成海藻糖。因此，測定TPS活性對于

研究植物逆境具有重要意義。

測定原理：

TPS 催化 UDPG 與 G6P 生成海藻糖-6-磷酸，同時產生 UDP；UDP 在丙酮酸激酶與乳 酸脫氫酶作用下，氧化 NADH 為 NAD+，NADH 的下降速率與 UDP 含量成正比，通過 340nm 吸光度下降速率反映 TPS 活性。

需自備的儀器和用品：

分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶， 4℃保存；

試劑一：粉劑×1 瓶， -20℃保存； 臨用前加入 10mL 試劑五溶解，用不完的試劑分裝后-20℃ 保存，禁止反復凍融；

試劑二：粉劑×2 瓶， -20℃保存；臨用前每瓶加入 25mL 試劑五溶解；現配現用；

試劑三：粉劑× 1 瓶， -20℃避光保存；臨用前加入 0.1mL 試劑五溶解，用不完的試劑分裝后 -20℃保存，禁止反復凍融；

試劑四：100μL×1 瓶， 4℃避光保存；臨用前低速離心，以防止試劑沾在管壁；

試劑五：液體 100mL× 1 瓶，4℃保存；

工作液的配制： 臨用前， 先配置好 1 瓶試劑二和試劑三， 然后在試劑二瓶中加入 25μL 試劑 三和 25μL 試劑四， 充分混勻，現配現用。

樣品測定的準備：

1、細菌或細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量 （104 個）： 提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液）， 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3S，間隔 10S，重復 30 次） ；8000g ，4℃離心 10min，取上清， 置冰上待測。

2、組織的處理： 按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液） ，冰浴中勻漿。 8000g  

4℃離心 10min，取上清， 置冰上待測。 測定步驟

1 、在 EP 管中加入如下試劑

混勻， 30℃反應 20min ，95℃水浴 2min 滅活， 冷卻至室溫。10000g 4℃離心 5min，取上層 反應液待測。
2、工作液配制： 詳見試劑的組成和配制中工作液的配制。
3、在 1mL 玻璃比色皿中加入如下試劑

混勻，測定 340nm 下 5min 后吸光值 A1 與 10min 后吸光值 A2 ，ΔA=A1-A2。
TPS 活力計算：
1、按照蛋白濃度計算
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
TPS 活力(nmol/min/mg prot)=ΔA×V 反總÷  ( ε×d）×109÷（V 樣×Cpr）÷T×3
=643×ΔA ÷Cpr
2、按樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
TPS 活力(nmol/min/g  鮮重)=ΔA×V 反總÷  ( ε×d）×109÷（W× V 樣÷V 樣總） ÷T×3
=643×ΔA÷W
3、按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
TPS 活力(nmol/min/104  cell)=ΔA×V 反總÷  ( ε×d）×109÷（V 樣×細胞數量）÷T×3
= 1.28×ΔA
V  反總：反應體系總體積，1mL；ε：NADH 摩爾消光系數， 6.22×103  L / mol /cm；d：比色 皿光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積， 0.15 mL；V 樣總：加入提取液體積， 1 mL；T：反應 時間， 5  min；3，稀釋倍數；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量；細胞數量， 500 萬。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購?？商峁W美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源，加強網絡建設，提高公司內部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優惠的價格。

海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測試盒