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詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
蛋白質羰基測試盒
微量法100T/48S
注意：正式實驗之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
蛋白質羰基是多種氨基酸在蛋白質的氧化修飾過程中的早期標志，其含量高低表明蛋白質氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質氧化損傷的主要指標。
測定原理：
羰基與2,4-二硝*苯肼反應生成紅色2,4-二硝*苯腙，在370nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器：
天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機、漩渦震蕩儀、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、無水乙醇、乙酸乙酯。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑0.1g×5支，4℃避光保存。（使用前根據樣品數，每支加1mL水溶解，每支為10個樣品用量）
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑五：根據測定樣品量，將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。
試劑六：液體60mL×1瓶，4℃保存。
樣品處理：
組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，于4℃，4000g離心10min，取上清，加入0.1mL試劑一，室溫放置10min，4℃，10000g離心10min，取上清待測。
細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
血清等液體樣本：直接測定。
測定步驟和操作表：
分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長至370nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |
樣品（μL） | 60 | 60 |
試劑二（μL） | 120 | |
試劑三（μL） | 120 | |
混勻，37℃避光反應1h | ||
試劑四（μL） | 150 | 150 |
靜置5min，4℃，12000g離心15min，棄上清，留沉淀 | ||
試劑五（μL） | 300 | 300 |
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀 | ||
試劑五（μL） | 300 | 300 |
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀 | ||
試劑五（μL） | 300 | 300 |
漩渦混勻，4℃，12000g離心10min，棄上清，留沉淀 | ||
試劑六（μL） | 300 | 300 |
漩渦混勻，37℃溫育15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000g離心15min，取上清200μL于微量石英比色皿/96孔板中，測定A370。ΔA=A測定管-A對照管 | ||
計算公式：
a．用微量石英比色皿測定的計算公式如下
按照樣本蛋白濃度計算
蛋白質羰基含量（μmol/mg prot）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(V樣×Cpr) =0.227×ΔA370÷Cpr
按照樣本重量計算
蛋白質羰基含量（μmol/g 鮮重）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷W
3. 按照細胞數量計算
蛋白質羰基含量（μmol/104cell）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(細胞數量 ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷細胞數量
按照液體體積計算
蛋白質羰基含量（μmol/mL）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷V樣=0.227×ΔA370
V反總：反應體系總體積，0.3 mL；ε：羰基毫摩爾消光系數，22 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.06 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL，W：樣本質量，g
用96孔板測定的計算公式如下
1. 按照樣本蛋白濃度計算
蛋白質羰基含量（μmol/mg prot）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(V樣×Cpr) =0.454×ΔA370÷Cpr
2. 按照樣本重量計算
蛋白質羰基含量（μmol/g 鮮重）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.454×ΔA370÷W
3. 按照細胞數量計算
蛋白質羰基含量（μmol/104cell）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷(細胞數量 ×V樣÷V樣總) =0.454×ΔA370÷細胞數量
4. 按照液體體積計算
蛋白質羰基含量（μmol/mL）= [ΔA370×V反總÷（ε×d）]÷V樣=0.454×ΔA370
V反總：反應體系總體積，0.3 mL；ε：羰基毫摩爾消光系數，22 L/mmol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.06 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL，W：樣本質量，g
注意事項：
1. 試劑一使用前根據要測定的樣品數現配，配置好后4℃保存，若變為黑色，則不能使用。
2. 試劑二見光易分解，反應需嚴格避光。
上海牧榮生物科技有限公司
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