多糖多酚植物DNA提取試劑盒

多糖多酚植物DNA提取試劑盒

適用范圍:多糖多酚植物 DNA 提取

試劑盒組分：

Buffer CA 100ml*2

Buffer FC 100ml*3

Buffer GW 33ml*2

Buffer GE 20ml吸附柱 200 個

保存條件：Buffer GE 4°C其它組分室溫保存

產品說明本試劑盒采用高效、專一結合核酸的離心吸附柱和*特的緩沖系統，適合從各種不同的新鮮或凍存植物組織中提取基因組 DNA，并可最大限度去除植物組織中的雜質。本試劑盒無需使用酚/氯仿抽提，操作安全。提取的基因組 DNA 片段大、純度高、質量穩定可靠，適用于 PCR、熒光定量 PCR、分子標記、文庫構建等實驗。

自備試劑：無水乙醇

實驗前準備及重要注意事項1．樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。2．第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在 Buffer GW 中加入無水乙醇。使用前請檢查 Buffer CA是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀，請將 Buffer CA置于 65℃水浴重新溶解。操作步驟1．取植物新鮮組織 50-200mg 左右，加入液氮充分研磨。2．將研磨后的粉末收集到離心管（自備）中，加入 1ml Buffer CA，渦旋振蕩 1 分鐘，65℃水浴 30 分鐘，期間顛倒幾次，使其充分裂解。3．將離心管轉入離心機中 13,000×g 室溫離心 3 分鐘。4．小心吸取 800ul 上清到一個新的 2ml 離心管（自備），加入等體積的酚：氯仿：異戊醇=25：24：1 的混合液，渦旋振蕩 1min，室溫放置 5min。5. 13,000×g 離心 3 分鐘，小心吸取上清到一個 2ml 離心管（自備），注意不要吸到界面物質。6．加入 2 倍體積的 Buffer FC，充分混勻（如 450ul 濾液加入 900ul Buffer FC）。注意：加入 Buffer FC 后應立即混勻，可能會產生沉淀但不影響后續實驗。7．將上步所得溶液和沉淀全部加入到已裝入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次轉入。13,000×g 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。8．向吸附柱中加入 500ul Buffer GW（使用前檢查是否已加入無水乙醇），13,000×g離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。注意：如吸附膜呈現綠色，向吸附柱中加入 500ul 無水乙醇，13,000×g 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。9．重復步驟 8。10．13,000×g 離心 2 分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，晾干。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應（酶切、PCR 等）。11. 將吸附柱放到一個新離心管（自備）中，向吸附膜的中間部位懸空滴加入 50ulBuffer GE 或滅菌水，室溫放置 2-5 分鐘，13,000×g 離心 1 分鐘，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。注意：1）如果下游實驗對 pH 值或 EDTA 敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的 pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5（可以用 NaOH將水的 pH 值調到此范圍），pH 值低于 7.0 時洗脫效率不高。2）離心之前室溫孵育 5 分鐘可以增加產量。3）如果要提高 DNA 的終濃度，可以將步驟 10 所得的 DNA 洗脫液重新加至吸附膜上，重復步驟 10；4）因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用BufferGE 洗脫并于-20℃保存。

本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

上海牧榮生物科技有限公司

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